待業中的賴瑞（班史提勒 飾）終於找到工作，進入自然歷史博物館夜班守衛。本以為看守無人的博物館很輕鬆，卻在一個神奇夜晚，展覽品瞬間復活，倒楣的賴瑞整晚被暴龍化石震撼覓食，緊接著匈奴王軍隊、羅馬戰士，甚至山頂洞人、獅子、老虎都對他窮追不捨，賴瑞做夢也想不到，所有古物包括古生物，半夜都會復活。賴瑞在深夜唯一能信任的，是前總統蠟像羅斯福（羅賓威廉斯 飾），在老羅斯福、西部牛仔和印地安公主的協助下，賴瑞要應付這群難纏的活標本，搶救幾乎解體的博物館…顧全古物，也保住飯碗。

《博物館驚魂夜》，將藉由另類夜間導覽，帶領觀眾前往美國自然歷史博物館翻天覆地，裡頭有最炫目的視覺特效，還有哈利波特系列電影的奇幻冒險旅程，讓繪本上想像力十足的世界真實呈現在觀眾面前。聽起來有點小恐怖的大復活故事，讓埃及法老、神鬼戰士、侏儸紀暴龍、復活島巨石、西部牛仔、印地安公主和匈奴王同場較勁，只要神祕館藏能活起來，世界上再也沒有比博物館更熱鬧有趣。

電影以二十一世紀頂尖特效，重新打造美國自然歷史博物館，讓它在夜間繼續運轉，獻給所有不想長大的成人觀眾和小朋友。喜劇天王班史提勒接演此片，就是因為對這座博物館有深厚情感，他同時邀來好友歐文威爾森加入歷險行列，這部題材特殊的影片，也吸引金獎影帝羅賓威廉斯助陣。《博物館驚魂夜》另有IMAX版本，讓栩栩如生的驚奇特效，更直接呈現在觀眾面前。