《刺客教條：兄弟會》將同時提供單人與多人玩法，玩家可以從多位刺客角色中選擇喜愛的角色，藉由其別具特色的武器與暗殺技巧，來與全球玩家線上對抗，遊戲中將有眾多遊戲模式，與詳盡、豐富的地圖可供玩家較勁。

　　玩家在遊戲中將再度與《刺客教條 2》男主角 Ezio 一同冒險，加入他永無止境地與強大的聖堂騎士團對抗的生涯。如今的 Ezio 已經是傳奇性的刺客大師，他將深入義大利代表性的城市、同時也是權力的中心「羅馬」，在那裡他將要直搗敵人的心臟、對抗貪婪與腐敗。